IMPORTANCIA DEL CULTIVO PARA BÚSQUEDA DE Candida spp EN SECRECIÓN VAGINAL

Daicy Argenis Plazas*, Sandra Lizeth Ordoñez*,
Victoria Eljach Pacheco**, Fabiola Eugenia González**

RESUMEN Candida spp, es colonizador de la vagina en un 15 a 20% de las mujeres y se estima que el 75 % padecen un episodio de candidiasis vulvovaginal durante su vida, y un 40% a 50% desarrolla infección vaginal recurrente refractaria al tratamiento. Objetivo: analizar la necesidad de solicitar cultivo para hongos de secreción vaginal. Métodos: Se realizó un estudio en 203 mujeres, se les recolectó muestra para estudios micológicos y se aplicó una encuesta estructurada de las variables de estudio. Resultados: El 27.2% de las muestras fueron positivas para cultivo de Candida spp, de las cuales habían resultado negativos 32.7% en el examen en fresco y el 41.8% en la tinción. Se aisló Candida albicans (69.1%), C. tropicalis (9.1%), C. parapsilosis (7.3 %). Se demostró que el examen directo no es suficiente para identificar la presencia de levaduras del género Candida debido a su baja sensibilidad, el 40 % de las pacientes positivas para cultivo de Candida, presentaron flujo vaginal pero no manifestaron prurito ni eritema. Conclusión: La solicitud por parte del personal médico del cultivo para hongos de secreción vaginal, contribuye a optimizar diagnósticos para tratamientos precoces y evitar complicaciones causada por este hongo.

Palabras Clave: Cándida, Candidiasis vulvovaginal, cultivo para hongos.

ABSTRACT
Candida spp, is colonizador of the vagina in 15 to 20% of the women and esteem that 75% suffer an episode of vulvovaginal candidiasis during their life, and a 40% to 50% develop refractory recurrent vaginal infection to the treatment. Objective: to analyze the necessity to ask for culture for vaginal secretion fungi. Methods: A study was made in 203 women, vaginal secretion sample was collected to them for micológicos studies and I am applied a structured survey of the study variables. Results: The 27,2% of the samples were positive for Candida culture spp, from which had been negative 32,7% in the fresh examination in and the 41,8% in the tinción. was isolated Candida albicans (69,1%), C. tropicalis (9,1%), C. parapsilosis (7,3%). It was demonstrated that the direct examination is not sufficient to 2

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Recibido para evaluación: febrero 2 de 2008. Aprobado para publicación: febrero 27 de 2008

* Biólogas, Facultad de Ciencias Naturales, Exactas y de la Educación, Universidad del Cauca, Popayán, Colombia.

** Grupo de Investigación BIOINESMI, Departamento de Medicina Interna, Facultad Ciencias de la Salud. Universidad del Cauca

Correspondencia: Departamento de Medicina Interna, Facultad Ciencias de la Salud. Universidad del Cauca, Carrera 6 No. 13 N 50 Popayán, Colombia. Email: fegonza@unicauca.edu.co

identify the leavening presence of the Candida sort due to its low sensitivity, 40% of the positive patients for culture of Candida, presented/displayed vaginal flow but they did not show prurito nor eritema. Conclusions: The request on the part of the medical personnel of the culture for vaginal secretion fungi, contributes to optimize diagnoses precocious treatments and to avoid complications caused by this fungus.

Key words: Candida, vulvovaginal Candidiasis, culture for fungus

INTRODUCCIÓN La vagina, se extiende desde el cuello del útero hasta la vulva, suele estar colonizada por muchos microorganismos, en edad fértil esta flora habitualmente consta de Difteroides, Lactobacilos, Micrococcus, Staphylococcus epidermidis, Enterococcus, Estreptococos microaerofilicos y anaerobios, Ureaplama y hongos como por ejemplo Candida spp en un 15 a 20% de mujeres sanas. (1)

Candida spp es un hongo levaduriforme oportunista, cuyas infecciones ocurren como resultado de alteraciones de la defensa del huésped, por factores iatrogénicos, luego de la administración de antibióticos de amplio espectro, tratamiento con esteroides, drogas citotóxicas, y enfermedades de base. (1-3,5-6, 8, 10,1117,21)

La vaginitis por Candida spp, principalmente las especies C. albicans, C. glabrata ocurre más a menudo en mujeres embarazadas, diabéticas y las que reciben tratamiento antibacteriano y hormonal, En mujeres no embarazadas la incidencia de vaginitis por Candida spp es del 10 al 17% (2) pero esta incidencia aumenta aproximadamente el doble durante el embarazo. Los cambios fisiológicos en la mucosa vaginal, dan como resultado un crecimiento excesivo de Candida spp, lo que se ha correlacionado con un aumento de la humedad y sustratos carhohidratados, disminución local de transferrina, que lleva un aumento de los niveles de hierro disponible, aumento de la secreción de esteroides, y disminución de inmunoglobulina A específica.(3); actualmente se considera que los estrógenos aumentan la adherencia de la Candida spp en el epitelio vaginal y así su virulencia (1); la infección intraamniótica por Candida spp es causa de aborto, parto prematuro, ruptura prematura de membranas e infección tanto materna como neonatal (2); desarrollando aftas bucales, infecciones perinatales y genitales, gastroenteritis con diarrea severa y dermatitis del pañal en el neonato. (3)

Se estima que un 75% de las mujeres presentarán una infección candidiásica vulvovaginal en al menos una ocasión a lo largo de su vida, y la mitad de ellas presentarán al menos dos o tres episodios infecciosos en un año, aunque sólo en un 5% de casos la enfermedad se vuelve crónica, desarrollando Candidiasis vulvovaginal recurrente (CVVR)(22). Se habla de CVVR cuando se diagnostican cuatro episodios a lo largo un año(4) .

La vulvovaginitis por Candida spp se manifiesta con prurito, eritema con secreción vaginal de color blanco cremoso, con molestias locales que pueden originar dispareunia y dolor a la micción. En CVVR es recomendable valorar la importancia de la presencia de Candida 3

durante episodios sintomáticos repetidos, para establecer si la recurrencia de los signos de enfermedad se relacionan con la reaparición del hongo. E CVVR la etiología es multifactorial, pero es usualmente definida como idiopática, con factores predisponentes no conocidos. Se ha postulado una disfunción o deficiencia inmune. (5)

En la etiología de candidiasis vulvovaginal predomina C. albicans en un 90% seguida de C. glabrata en un 5-15% y en menor proporción otras especies. La resistencia que presenta C.glabrata a muchos azoles, especialmente al fluconazol dificulta el tratamiento. (6)

Clínicamente la sintomatología de vaginitis por las diferentes especies de Candida y la tricomoniasis vaginal son similares y carecen de signos o síntomas patognomónicos, por lo que un diagnóstico basado exclusivamente en el examen clínico tiene muchas causas de error.(7)

Tradicionalmente el diagnóstico de vaginitis candidiásica se ha realizado clínicamente sin confirmación del laboratorio, o algunas veces solo se solicita el examen microscópico directo, el cual permite obtener información respecto a la presencia de hongos y su abundancia; la observación directa de levaduras en muestras vaginales y de cérvix tiene un valor cuestionable, pues pueden ser parte de la flora comensal; sin embargo, la presencia de leucocitos polimorfonucleares es un signo sugestivo de infección. La tinción de Gram mejora bastante la observación en fresco, puede distinguirse más fácilmente las células levaduriformes como grampositivas y con su típica forma ovoide, así como la formación de blastoconidias, y pseuhohifas para Candida productoras de estas estructuras, pero es importante tener en cuenta que C. glabrata no es dimórfica, solo forma blastoconidias tanto como colonizador y como patógena. En la candidiasis vaginal, la microscopía presenta, en general una baja sensibilidad a veces inferior al 50%, por lo que siempre debe realizarse el cultivo para identificar el hongo levaduriforme aislado, ya que en vagina se pueden encontrar otros hongos levaduriformes como Trichosporom y Rhodotorula, Sacaharomyces cereviciae e igualmente es importante tipificar la especie de Candida aislada, para realizar un tratamiento específico. (8)

El aislamiento de Candida a partir de exudado vaginal en mujeres asintomáticas no es un hallazgo infrecuente, se estima que entre un 20 y un 25% de mujeres premenopáusicas asintomáticas presentan un cultivo positivo para Candida en vagina. (9)

A nivel clínico se ha considerado que no es de utilidad realizar cultivo de secreción vaginal en mujeres asintomáticas, que solo estaría indicado cuando el cuadro clínico es sugestivo y no se logra observar las formas de la levadura al examen microscópico(10); pero otros autores consideran que una colonización vaginal por Candida es de extrema importancia y que la infección clínica no es sino la parte visible del iceberg, teniendo en cuenta que es importante conocer el mecanismo patogenésico por lo que una colonización asintomática puede transformarse en una infección clínica.(9) La identificación de la especie de Candida permitirá un tratamiento especifico para la erradicación del hongo, y podría evitar que Candida en un momento determinado pudiera causar una vaginitis recurrente en la paciente.(9)
El incremento de especies no C. albicans, se ha visto principalmente en la CVVR, esto debido a tratamientos antifúngicos inadecuados, generalmente automedicados, lo que puede llevar a variaciones antigénicas y mutaciones de las especies de Candida. (9)

En nuestro medio, generalmente la vulvovaginitis es diagnosticada por las manifestaciones clínicas de la paciente, muy pocas veces se realiza el estudio microscópico de secreción vaginal, pero sin solicitar cultivo que permita aislar e identificar el agente etiológico, El objetivo de la investigación fue analizar la necesidad de emplear medios de cultivo para identificar levaduras aisladas de secreción vaginal en pacientes sintomáticas y asintomáticas como complemento a las técnicas de rutina solicitadas por el personal médico para diagnóstico de candidiasis vaginal.

METODOLOGÍA Se realizó un estudio descriptivo, de corte transversal en el que participaron 202 mujeres; el tamaño de la muestra se calculó teniendo en cuenta un error de 5% utilizando el programa de EpiInfo con un nivel de significancia de p ≤ 0.05 .Mujeres entre 18 a 35 años de edad, que durante cuatro meses acudieron a un examen rutinario de secreción vaginal a la EPS Comfacauca y al Centro de Salud Sur Occidente de la ciudad de Popayán, independiente de la presencia o ausencia de síntomas. A cada paciente se le realizó una encuesta para conocer datos sociodemográficos, clínicos y epidemiológicos, relacionados con el estudio, cada paciente firmó su consentimiento informado; se tomó muestra de secreción vaginal con hisopos estériles para la realización de estudio micológico. Parte de la muestra se procesó para estudio microscópico con KOH al 20% y solución salina entre lámina y laminilla, y extendido en portaobjetos para tinción de gram, la otra muestra se cultivó sobre agar Sabouraud con cloranfenicol, a 37°C durante 48 horas, transcurrido este tiempo se realizó una lectura para registrar crecimiento de colonias confirmando la presencia de levaduras mediante el montaje microscópico en azul de Lactofenol; los cultivos negativos se dejaron en incubación prolongada hasta por 3 semanas antes de descartarlos; Los aislamientos obtenidos se analizaron por prueba de tubo germinal; Cada cepa fue inoculada en 0.5 ml de suero humano y después de tres horas de incubación a 37 °C, se practicó un examen microscópico en busca de la producción de tubos germinal. Luego a todas las cepas se les realizo prueba de asimilación de azucares (API Yeast Identification, API 20C Aux, Biomerieux products), que permitió identificar las especies de Candida aisladas.

La información se procesó en el Sistema Excel para Windows 97, la cual se transfirió al paquete estadístico SSPS versión 10 calculando frecuencias, porcentajes y análisis bivariados.

RESULTADOS Se encontró que el 27.2%(55/202) fueron positivas para cultivo de Candida spp, de las cuales habían resultado negativas 32.7%(18/55) en el fresco y el 41.8% (23/55) en la tinción de Gram 5

de las 202 pacientes estaban en mayor porcentaje las pacientes entre 21 a 25 años (32.7%), seguidos de edades entre 26 a 30 años (25.2%), el estado civil que predomino era soltera en un 45.5%(92/202), seguido de unión libre 34.7% (70/202); con nivel de educación de un 48.5%(98/202) en secundaria, y 19.3% (39/202) universitaria.

De las 202 pacientes 191(94.6%) presentaban flujo vaginal, de las cuales a 55 (28.3%) se les aisló Candida spp, a 59(29.2%) se les observo Gardnerella vaginalis al examen microscópico, y a 4(2.0%) se les observo Trichomonas vaginalis.

De las 55 pacientes que se les aisló Candida spp, se encontró que estaban en mayor porcentaje las pacientes entre 21 a 25 años (30.9%), seguidos de edades entre 18-20 años (27.3%), el estado civil que predomino era soltera en un 52.7% (29/55), seguido de unión libre 27.3% (15/55); con nivel de educación de un 45.5%(25/55) en primaria, y 25.5% (14/55) universitaria.

En cuanto a signos y síntomas de las pacientes que se les aisló Candida spp, 54 (98.2%) presentaron flujo vaginal, de las cuales, 22 (40%) pacientes no refirieron prurito ni eritema, 10(18.2%) solamente manifestaron prurito,10 (18.2%) manifestaron prurito y eritema, 2(3.6%) ardor, 6 (10.9%) ardor , prurito y eritema (Tabla 1).

De las pacientes que se aisló Candida spp, a 18.2% (10/55) se observo también Gardnerella vaginalis al examen microscópico. Y ninguna de ellas se les observo Trichomonas vaginalis.

En cuanto a las características del flujo se encontró que el 63.6% (35/55) presentaron flujo vaginal de color blanquecino, 32.7% (18/55) flujo de color amarillo, y el 3.6%(2/55) un flujo de color café.

Al valorar la presencia de leucocitos al examen microscópico, se encontró que 32.7% (18/55) presentaron reacción leucocitaria leve, 29.1% (16/55) reacción leucocitaria moderada y 21.8% (12/55) reacción leucocitaria alta.

En cuanto a factores asociados de las 55 pacientes 32.7% (18/55) estaban embarazadas, 5.5%(3/55) estaban tomando antibióticos. En cuanto a edad de inicio de las relaciones sexuales 45.5% (25/55) fue antes de los 18 años y 54.5 (30/55) después de los 18 años. El 6
65.5%(36/55) planifican; en cuanto a método de planificación en estas pacientes 18.2%(10/36) planifican con preservativo, 16.4% (9/36) con DIU, 12.7%(7/36) con anticonceptivos orales, 12.7%(7/36) con inyecciones. El 45.5% (25/55) manifestaron que habían sufrido de infección de tracto vaginal antes y habían usado tratamiento empírico para hongos, 5 pacientes manifestaron haber sufrido aborto, y 3.6 % (2/55) pacientes padecían de diabetes. (Tabla 2)

De los aislamientos de Candida se encontró que el mayor porcentaje lo presentaron Candida albicans 1 y 2 (69.1%), seguido de Candida tropicalis en un 9.1%, con menor frecuencia C glabrata en un 3.6%. (Tabla 3)

Según signos y síntomas encontramos que el 98.8 (54/55), presentaban flujo vaginal, que es una de las manifestaciones de la vulvovaginitis por Candida spp, pero 22 pacientes refirieron que no presentaban prurito y eritema, que generalmente acompaña a la infección por Candida, lo que muchas veces puede confundir el diagnóstico clínico. Cabe destacar un estudio realizado por la Universidad de Sul de Santa Catalina (Brasil), en el cual se analizó según sintomatología de la paciente la sensibilidad del diagnóstico clínico, se observó que la sensibilidad fue del 38% y una especificidad del 88%, en el que se sugiere que este debe ser confirmado con el laboratorio, y que no existen manifestaciones patognomónicas de candidiasis vulvovaginal; se demuestra que debe realizarse al menos el examen microscópico para rastrear un diagnostico o siempre que sea posible confirmar con cultivo(16). En un trabajo realizado en Cuba, sobre las características clínicas asociadas a candidiasis se encontró, que el signo predominante era el prurito en un 66.69% y se menciona que la intensidad de los síntomas no esta relacionado con el numero de levaduras presentes y sugieren que estas son producto de la reacción inmunológica (17).

Sobre factores asociados a vulvovaginitis candidiasica, encontramos que 18 pacientes estaban embarazadas, 3 tomaban antibióticos, y 7 planificaban con anticonceptivos orales, factores que pueden favorecer la aparición de la Candidiasis, datos muy similares a otros trabajos en los que se referencia estos factores de riesgo asociados a la presentación de vulvovaginitis por Candida. En un trabajo realizado en Cuba se encontró que mas del 60% de los aislamientos de Candida estuvieron relacionados con factores de riesgo(17) , también se relacionó con el uso del dispositivo intrauterino (DIU) como método de control de 8
natalidad (encontraron 22/138 pacientes positivas para cultivo de Candida). En nuestro trabajo encontramos 9 pacientes que utilizaban DIU con cultivo positivo para Candida. Braun y Vera(3), postulan que es posible que el DIU se colonice por Candida, por vía ascendente; si no es retirado, al avanzar el embarazo se produce el crecimiento uterino y quedará alojado en el espacio coriodecidual o en la placenta, aislado de la vagina. Si el DIU esta colonizado, la interacción de factores maternos y los propios del germen determinaran que se produzca o no la infección del espacio coriodecidual, que a su vez puede progresar comprometiendo las membranas y posteriormente el liquido amniótico y el feto; en los menores de 28 semanas seria causa de aborto, muerte fetal o muerte neonatal, en los niños de 29 a 36 semanas se presentaría el cuadro clínico típico con infección cutánea superficial, la que puede asociarse a neumonitis por Candida.(3). En el estudio encontramos que 2 pacientes de las que se aisló Candida y que utilizaban DIU habían sufrido aborto, lo cual no mostraba una relación significativa entre estos factores.


Los datos aportados en este trabajo, nos indican que es importante que se identifique la especie de Candida, para que el médico pueda formular un tratamiento específico según el agente etiológico aislado, ya que demostramos que el examen microscópico tiene baja sensibilidad, y que el diagnóstico de vaginitis por Candida no se puede basar solamente en el examen clínico, que se debe realizar un estudio microbiológico completo, que incluya un cultivo para hongos, en el cual se identifique hasta la especie de Candida aislada, y se realice pruebas de sensibilidad a los antifúngicos de uso común, ya que se tienen especies de Candida, como C. glabrata que puede causar vaginitis y es resistente a fluconazol, antifúngico que es utilizado en este tipo de infección y muchas veces como tratamiento empírico.

Según los resultados de este trabajo, recomendamos que en pacientes con factores de riesgo para sufrir vaginitis, como en embarazadas, diabéticas, pacientes VIH positivo, y principalmente en las que sufren CVVR se haga búsqueda de colonización para Candida a través de un cultivo de secreción vaginal y un antifungigrama, para realizarles profilaxis con antifúngicos y así se podría evitar complicaciones. Según García Heredia y colaboradores, en los últimos años el tratamiento profiláctico de infecciones oportunistas con fluconazol llevó a la reducción de C. albicans y a la selección de C. glabrata en el ecosistema microbiano, así mismo, la detección de cepas de C. albicans con resistencia secundaria al fluconazol, generó interés por conocer en qué grado la resistencia a las drogas antifúngicas podía relacionarse con candidiasis vaginal recidivante. 25


Agradecimientos Doctor Diego Zambrano Director Medico IPS Comfacauca- Popayán, Doctora Maria Virginia Pinzón por la colaboración en la toma de muestras en el Centro de Salud Sur Occidente de la ciudad de Popayán, Mary Luz Alegría, Evila Hoyos y Julia Hoyos auxiliares de laboratorio IPS Comfacauca- Popayán, Claudia Caicedo, Maria Isabel Plaza, auxiliares de laboratorio Microbiología y Parasitología Facultad Ciencias de la Salud,Universidad del Cauca.

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Candida albicans con tinción flourescente Foto CDC.